Современная диагностика вич в клиниках

Диагностика ВИЧ-инфекции

ВИЧ-инфекция является опасным заболеванием, получившим широкое распространение во всем мире. По официальной информации Всемирной Организации Здравоохранения, в настоящее время заражено более 37,9 миллионов людей. При отсутствии терапии, болезнь переходит в стадию синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИДа), сопровождаемого оппортунистическими инфекциями и постепенной деградацией иммунитета.

Лекарство, при помощи которого можно навсегда избавиться от ВИЧ, еще не изобретено. Но своевременно начатая терапия позволяет достигнуть ремиссии и предотвратить развитие СПИДа. Своевременность лечения, в свою очередь, зависит от диагностики ВИЧ-инфекции. Чем раньше будет выявлен диагноз, тем эффективнее окажутся меры по борьбе со смертельно опасным заболеванием.

Методы диагностики ВИЧ-инфекции

Методы диагностики ВИЧ-инфекции в большинстве случаев являются лабораторными. Основным путем передачи вируса остается контакт с зараженной кровью, поэтому для исследования берется именно эта биологическая жидкость.

Для диагностики ВИЧ-инффекции чаще всего применяются 2 метода:

  • Скриннинговый (ИХЛА или ИФА). Тесты данной категории отличаются высоким уровнем чувствительности (до 99%). При помощи этих методов диагностики ВИЧ-инфекции определяется соотношение антитело/анитиген по отношению к ВИЧ. Определяются иммуноглобулины к штаммам: ВИЧ-1, ВИЧ-2, ВИЧ-1-N, ВИЧ-1-O, ВИЧ-1-M.
  • Подтверждающий (иммоноблоттинг). Тест позволяет определить наличие в сыворотке крови специфических белков, характерных для возбудителя ВИЧ-инфекции. Обнаружение таковых подтверждает предварительно поставленный диагноз.

Важно учесть, что отрицательный результат скриннингового тестирования не является гарантией отсутствия заражения. Иммуноглобулины не обнаруживаются в течение первых месяцев после инфицирования. Эта фаза называется «периодом окна». Рекомендуется пройти поэтапную диагностику ВИЧ-инфекции для точного результата. Рассмотрим подробнее основные способы определения заражения.

Скриннинговые тесты

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции начинается со скриннингового тестирования на антитела. У здоровых пациентов иммуноглобулины ВИЧ-1 и ВИЧ-2 отсутствуют. У инфицированных они обнаруживаются по причине иммунного ответа на инородный агент.

Основным методом диагностики ВИЧ-инфекции на этапе скриннинга является иммуноферментный анализ (ИФА). Чувствительность теста составляет 99,5%. Обследование проводится не ранее чем через 1 месяц после предполагаемого заражения. Рекомендуется сдавать анализ через полгода после инфицирования.

Результат тестирования может быть положительным или отрицательным.

Отрицательный говорит об отсутствии иммуноглобулинов ВИЧ в крови пациента. С точностью можно утверждать лишь то, что обследуемый в данный момент не заразен. Для точной диагностики следует сдать кровь на анализ через 1-2 месяца. Важно учитывать, что на стадии СПИДа показатели обследования трактуются как отрицательные.

Положительный результат указывает на наличие антител. Во избежание лабораторной ошибки, тестирование проводится 3 раза. При повторении положительных результатов объявляется о предварительном диагнозе ВИЧ.

Подтверждающие тесты

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции включает проведение подтверждающего тестирования на наличие патогенных белковых сегментов. В этом случае применяется метод Western-blot (иммуноблоттинг).

Антитела к вирусным белкам ВИЧ в сыворотке крови в норме отсутствуют. Анализ позволяет выявить в биологической жидкости обследуемого иммуноглобулины к сегментам: gp41, gp120, gp160, р24, p18, р17 и их мутациям. В соответствии с положением Российского Центра по Профилактике и Борьбе со СПИДом, обнаружение любых из перечисленных выше антител можно считать подтверждением диагноза.

Если результат подтверждающего теста отрицателен, ВИЧ-статус обследуемого положительным не является.

Экспресс-тесты

В случае невозможности явки на лабораторную диагностику ВИЧ-инфекции, тест можно провести самостоятельно. Наборы для экспресс-тестирования продаются в стандартных аптеках и включают скарификатор для прокалывания пальца, тест-полоски и реактивы для проведения анализа. Результат тестирования готов в течение получаса.

Существуют экспресс-тесты на вирус иммунодефицита человека, применяемые перед срочным хирургическим вмешательством. В этом случае обследуется не кровь, а околодесневая жидкость. Пример подобной диагностики ВИЧ-инфекции — тест OraQuick.

Метод ПЦР при ВИЧ

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) не применяется при первичной диагностике ВИЧ-инфекции. Тесты используются для подтверждения диагноза и коррекции терапевтического процесса.

Анализ ПЦР может быть качественным или количественным. Качественная проба рассчитана на определение непосредственного нахождения вирусного ДНК в крови. Фрагменты генома патогена обнаруживаются с 10 по 33 день после инфицирования (по данным СDC). Результаты могут быть положительными или отрицательными.

Количественный анализ ПЦР при ВИЧ применяется для определения вирусной нагрузки в организме больного. Тесты бывают различного уровня чувствительности:

  • Повышенный — от 1 до 20 копий/мл.
  • Стандартный — от 40 копий/мл.
  • Низкий (устаревший) — от 200 или 500 копий/мл.

Расшифровка количественного анализа ПЦР проводится в клинических условиях.

Этапы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции

Этапы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции для пациента будут следующими:

  • Обращение в СПИД-центр по поводу сдачи крови на анализ. Сделать это можно анонимно.
  • Подготовка к тестированию. За 8 часов до явки в лабораторию обследуемому рекомендуется воздержаться от употребления пищи, спиртных напитков и табачной продукции.
  • Сдача скриннинговых тестов. Результаты готовы в течение 1-3 рабочих дней.
  • При положительном результате предыдущих анализов — сдача подтверждающих проб. Обычно специалисты назначают явку на тестирование в течение двух-трех недель после получения результатов предварительного теста.
Читайте также:  Фундук — калорийность, свойства, польза и вред, пищевая ценность

Последним этапом лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции является сдача крови на ПЦР для определения особенностей предстоящего лечения. Подробнее о современной терапии ВИЧ читайте по ссылке→

Для окончательной диагностики вич инфекции применяют

Генетический материал вируса

При этом важно понимать, что неправильное использование тестов или несовершенное оборудование сильно снижают точность анализов.

Сначала идет скрининг — постановка быстрых тестов, основанных на методе иммунохроматографии.

В случае положительного результата, еще один анализ крови проверяется другой тест-системой.

Если вторая проба отрицательная, ставится третий анализ с третьей тест-системой.

Положительный третий результат — показание к дообследованию методом ИФА или иммуноблоттингом.

В ряде случаев для окончательной верификации диагноза применяют молекулярно-генетические методики.

По такому алгоритму предлагается выявлять инфицированных среди категории социально дезадаптированных лиц.

Так как для проведения быстрого теста требуется не более 30 минут.

Хотя правильнее все же обратиться в ближайший кожновенерологический диспансер и там пройти полное и максимально точное обследование.

К такой рекомендации стоит прислушиваться.

Потому что достаточно часто люди одновременно с ВИЧ заражаются хроническими вирусными гепатитами и другими инфекциями, передающимися половым путем.

Из-за этого результаты быстрых тестов могут искажаться.

Например, заметные сложности представляет сифилис.

Трепонемная инфекция иногда приводит к ложноположительным срабатываниям иммуноферментных методов.

Лабораторная диагностика

Целью медиков является как можно более раннее выявление факта заражения.

К сожалению, возможностей обычной клинической лаборатории для этого недостаточно.

Так как требуется высокоточное и дорогостоящее оборудование, специально обученный персонал.

Такие лаборатории называются клинико-иммунологическими и оборудуются при крупных диагностических центрах или областных клинических больницах.

Алгоритм диагностики ВИЧ определяется тем, насколько полно оснащена лаборатория.

Без иммуноблота

Сначала идет проведение стандартного анализа ИФА.

При отрицательном результате человек считается здоровым.

Но если недавно был риск заражения, например — интим с ВИЧ-инфицированным человеком, обследование необходимо повторить через 4-6 месяцев.

Положительный ответ считается предварительным, и кровь берется еще раз.

Повторное исследование проводится на тест-системе другого производителя.

С иммуноблотом

Все так же, как и в разделе выше.

Но при положительном результате первой ИФА, второй образец крови направляется на иммуноблот.

Этот анализ является основным и подтверждает или исключает факт заражения.

Молекулярно-генетические тесты

На этапе диагностики их применяют достаточно редко, для уточнения наиболее спорных моментов.

Например — когда необходимо срочно установить, здоров человек или заражен.

Или когда клинические проявления свидетельствуют за ВИЧ/СПИД, а другие методики не дают ответа со 100% точностью.

Клиника

Распознать заражение по симптомам может только очень опытный врач.

И только тогда, когда заканчивается период бессимптомного носительства.

Даже несмотря на то, что на текущий момент, этиология, патогенез и эпидемиология инфекции достаточно хорошо изучены.

Инкубационный период составляет несколько дней или недель.

Затем следует фаза первичных проявлений.

Протекает она под маской ОРЗ (лихорадка, насморк, кашель) и поэтому остается не распознанной.

Длится несколько дней.

Любые лабораторные тесты в этом периоде также будут отрицательны.

Затем следует фаза вирусемии.

Она является чем-то похожей на сепсис.

Вирионы с током крови распространяются по всему организму и заражают все клетки, которые обладают особыми рецепторами (CD 4).

Проникнув внутрь клетки, генетический материал ВИЧ встраивается в ее ядро и заставляет начать производство новых вирусных частиц.

Клетка при этом погибает не сразу.

Отсюда и берется такой длительный бессимптомный период, достигающий нескольких лет или даже десятилетий.

Все современные тесты могут обнаружить факт заражения только спустя 2 или 3 месяца после инфицирования.

Когда в крови накопится достаточное для анализа количество антител IgG.

Исключение — ПЦР, которая нацелена на идентификацию генома возбудителей.

Дальше, с началом стадии СПИД, человек начинает болеть разными инфекциями:

  • Кандидоз
  • Криптококкоз
  • Пневмоциста
  • Массивные герпетические атаки (опоясывающий лишай)
  • Токсоплазмоз
  • Туберкулез

У человека со здоровым иммунитетом такие заболевания очень большая редкость.

Поэтому их еще называют маркерами ВИЧ-инфекции.

Как правило, эти процессы и становятся причиной гибели больного СПИДом человека.

Поэтому диагностика и выявление факта заражения ВИЧ служит самым действенным методом профилактики СПИДа, так как больной может начать получать лечение.

Также, что немаловажно, от заражения уберегаются близкие люди, члены семьи и половые партнеры.

Методы диагностики

В верхней части статьи мы упоминали несколько методик, которыми пользуются вирусологические лаборатории для диагностики ВИЧ-инфекции.

Пришла пора познакомиться с ними поближе.

Иммуноферментный анализ

Ранние варианты исследования допускали выявление только антител к ВИЧ.

Однако на современном этапе есть возможность обнаруживать этим методом один из специфических антигенов вируса (белок p24).

Основой для постановки классической реакции являются иммобилизованные (фиксированные к субстрату) на специальных пластиковых планшетах антигены ВИЧ.

Как правило, это — многолуночные пластинки из инертного пластика, позволяющие проводить исследование сразу нескольких десятков образцов крови.

Читайте также:  Бемегрид; инструкция по применению, описание, вопросы по препарату

Этапы:

  • Вскрытие планшета в стерильных условиях
  • Нанесение в лунки по нескольку капель сыворотки крови из исследуемых проб
  • Добавление проявляющих антител (синтезируются промышленным способом, входят в комплект тест-системы)
  • Оценка результатов и установка диагноза

Теперь опишем суть.

На дне лунок находятся антигены вируса, которые синтезированы и зафиксированы там изготовителем системы.

Когда добавляют сыворотку в лунки, антитела IgG к ВИЧ (если они есть) связываются с этими антигенами и тоже фиксируются к субстрату.

Проявляющая сыворотка содержит в себе антитела к IgG.

Эти белки связаны со специальным ферментом с молекулой красителя.

Если в лунке содержатся IgG, то проявляющие антитела освобождаются от фермента и там появляется окраска. Факт реакции подтверждается спектрофотометром, образец считается таким, что содержит в себе антитела.

Чувствительность метода колеблется между 93-100%.

Специфичность достигает 99%, однако нельзя исключить ложных срабатываний на IgG к другим возбудителям.

Поэтому верификация диагноза требует повторного проведения ИФА на другой тест системе или использования другого диагностического метода.

Иммуноблот

Другие названия — иммуноблоттинг, вестерн-блот, и в его основе тоже лежит метод ИФА.

Суть такова:

  • Промышленным путем создаются пластинки из нитроцеллюлозы, на которые электрофорезом в разных местах нанесены 5 разных белков возбудителя СПИДа.
  • На эти пластинки наносится исследуемая сыворотка.
  • Если человек заражен, то антитела прикрепятся в нескольких метах пластинки.
  • Визуализация результатов осуществляется добавлением проявляющих антител, как при ИФА.

Для того чтоб результат иммуноблоттинга считался положительным, должны появиться окрашенные полоски минимум в трех местах пластинки.

То есть должны быть выявлены антитела не менее чем к трем белкам ВИЧ.

В противном случае результат считается отрицательным или сомнительным.

Оценка реакции проводится специальным аппаратом на основе метода спектрофотометрии.

Поэтому человеческая субъективность при восприятии цвета на результаты теста не влияет.

Полимеразно-цепная реакция

Молекулярно-генетические методики вывели диагностику ВИЧ на качественно новый уровень.

С помощью ПЦР можно обнаружить инфекцию на тех этапах, при которых описанные выше серологические методы не информативны.

Т.е в самом начале процесса, когда антител еще нет.

И в продвинутой фазе, когда иммунная система поражена настолько, что антител уже нет.

Суть заключается в следующем:

  • Из периферической крови выделяют лимфоциты — типичные клетки-мишени для ВИЧ.
  • Экстрагируют нуклеиновые кислоты из клетки.
  • Обрабатывают пробу специальными реагентами-праймерами, которые «настроены» на выявление уникального участка провирусной ДНК, отвечающего за синтез стержневого белка ВИЧ.

Если такая реакция состоялась, то праймер начинает синтезировать этот фрагмент, многократно дублируя его.

За счет этого достигается очень высокая чувствительность метода.

При правильном и качественном проведении ПЦР, можно обнаружить 1 провирусную ДНК на 100 тыс. лимфоцитов.

Разработана модификация ПЦР, с помощью которой можно выявить истинную РНК вируса.

Это позволяет оценивать вирусную нагрузку (количество вирионов в крови), эффективность антиретровирусной терапии и находить резистентные к препаратам АРТ формы вируса.

Также только ПЦР подходит для дифференциальной диагностики между разными видами ВИЧ.

Быстрые тесты

Ни один из вышеперечисленных методов не подходит для массовой скрининговой диагностики.

В первую очередь — из-за высокой стоимости и необходимости в специальном дорогостоящем оборудовании.

Поэтому такую популярность получили тесты для экспресс-диагностики и, надо заметить — вполне заслуженную популярность.

Для их проведения не нужна высокотехнологичная техника и асептические условия: все помещается в один пакетик.

В нем есть тест-полоска с иммобилизованными антигенами, одноразовый скарификатор и буферный раствор с проявляющими антителами.

То есть перед нами очередной вариант хорошо изученной ИФА.

Прокалывается палец (нужна капиллярная кровь) и капля крови помещается в специальную лунку на полоске.

Затем туда же капают буферный раствор.

При положительном результате в окошке пластинки появляется поперечная полоска напротив специальной метки.

За счет чего методика называет хроматографической.

Чувствительность и специфичность метода сравнимы с иммуноферментным анализом.

Однако для верификации диагноза положительные пробы должны подтверждаться в специализированной микробиологической лаборатории иммуноблоттиногом или классическим аппаратным ИФА.

Без быстрых тестов не обойтись в ряде случаев:

  • При обследовании больших количеств людей
  • В случае необходимости в экстренном переливании крови
  • Срочная трансплантация органов
  • Тестирование беременных, уклонявшихся от женской консультации до родов

То есть тогда, когда необходимо получить действительно быстрый ответ.

Но для того, чтоб сделать заключение о наличии или отсутствии инфекции, нужно провести дифдиагностику вирусных инфекций.

Обязательно проводятся аппаратные лабораторные тесты.

Сроки

Слабым местом всех точных способов диагностики является долгое (сравнительно) ожидание результата.

Причина — высокая стоимость диагностического оборудования и расходных материалов.

Из-за чего требуется полная загрузка аппарата.

Так, если в лаборатории применяются планшеты на 96 лунок, то в работу образцы плазмы пойдут только тогда, когда медики насобирают 96 проб.

Из-за этого ответ центра можно получить спустя 5-10 или 14 дней от момента сбора и доставки образца крови.

А всего полноценное обследование с точным выводом об отсутствии инфекции потребует несколько месяцев.

Читайте также:  Цереброваскулярная болезнь что это такое, симптомы и лечение 1

Причина в том, что на ранних этапах развития инфекции (в пределах 2-3 месяцев после момента заражения), антител к ВИЧ слишком мало.

Этот период называется серологическим окном.

Поэтому если произошла рискованная по заражению ситуация — секс с ВИЧ-инфицированным или авария при оказании медицинской помощи или любая другая беда — анализ сдают сразу.

Если он отрицателен, то человеку назначают повторное обследование через какое-то время.

Средний период составляет 4-6 месяцев, хотя могут быть изменения в обе стороны.

Такие методические подходы диагностики и исключения ВИЧ применяются и в настоящее время.

Предложены они были еще в далеком 1997г Всемирной организацией здравоохранения и объединенной программой ООН по борьбе с ВИЧ/СПИД.

Диагностика ВИЧ: методы и исследования

Ранняя диагностика заболеваний – залог успешного лечения. Ставшее крылатым выражение, особенно актуально для ВИЧ-инфекции. Ведь заболевание неизлечимо полностью, и только своевременная диагностика позволяет взять течение болезни под контроль и выбрать тактику лечения, чтобы жить полноценной жизнью.

Ранний срок диагностики ВИЧ – со 2 недели от предположительного заражения.

Важность клинической диагностики ВИЧ

В понимании многих людей ВИЧ-инфицированный человек выглядит болезненно, изнеможенно. Он кашляет, чихает, чешется, стонет, у него все болит… На самом деле это не так! Проблема в том, что после инфицирования ВИЧ и в последующий инкубационный период симптомы полностью отсутствуют. Затем наступает острая фаза, на протяжении которой присутствуют симптомы, напоминающие ОРВИ или грипп. Но и они вскоре проходят, и наступает, так называемый, латентный период – продолжительный промежуток времени, когда ВИЧ-инфекция себя ничем не выдает. С момента инфицирования и до стадии пред-СПИДа может пройти порядка 10 лет, в течение которых, ни сам пациент, ни его окружение, даже и не подозревают о болезни. А когда она уже на полную мощность заявляет о себе, контролировать ее очень трудно. Сложно противостоять осложнениям ВИЧ, поддерживать практически разрушенную иммунную систему человека.

Очень важно понимать, что, хотя и есть группы риска – гомосексуалисты, наркозависимые и девушки легкого поведения – в основной массе, пациенты с ВИЧ-инфекцией – это обычные люди. Они учатся, ходят на работу, посещают общественные места, знакомятся в интернете – в общем, живут как все. К сожалению, но от ВИЧ никто не застрахован. Незащищенный половой контакт в порыве страсти, заветное тату без соблюдения стерильности, маникюр за полцены у начинающего мастера, уличная драка – все эти и множество других житейских ситуаций могут обернуться инфицированием ВИЧ.

Не ошибается лишь тот, кто не живет! Мы не можем знать все наперед, не можем исправить уже совершенных ошибок, но мы можем предпринять простые шаги для исправления их последствий – обратиться в ближайший кожно-венерологический диспансер, в местную клинику или специализированный СПИД-центр для сдачи анализов и ранней диагностики ВИЧ.

Благоприятные сроки для диагностики ВИЧ

Факт возможного инфицирования и плохое самочувствие без видимых причин – два веских основания для обращения к специалистам. Но отрицательный результат тестирования на антитела не всегда означает, что человек не инфицирован, так как существует период “серонегативного окна” (время между заражением и появлением антител), который составляет около трех месяцев. Поэтому лучше повторить их спустя 3 месяца с момента возможного инфицирования. Если же ответ опять будет отрицательным, но ваша тревога не проходит, и вы уверены в заражении ВИЧ, тогда лабораторную диагностику необходимо повторить спустя 6 месяцев после факта заражения.

Что касается плохого самочувствия, то поводом провериться на ВИЧ может быть сочетание следующих симптомов:

  • увеличение лимфатических узлов на шее, в паху, в области подмышек;
  • лихорадка;
  • мышечные или головные боли;
  • молочница и грибковые поражения, в том числе кандидоз полости рта;
  • воспаление слизистой носа, рта или глотки;
  • ночная потливость;
  • ломота в суставах;
  • длительная диарея;
  • тошнота, рвота;
  • резкое снижение массы тела;
  • высыпания на коже.

Важно понимать, что с момента, когда проявляются первые признаки ВИЧ-инфекции и до момента, когда заболевание переходит в латентную стадию, проходит очень мало времени – около 3-6 недель с факта инфицирования. Нельзя упускать из вида этот промежуток времени! Поскольку последующие 8-10 лет вы будет жить, нормально себя чувствовать и даже не подозревать о том, что больны ВИЧ-инфекцией. Драгоценное время будет упущено.

Современные методы диагностики ВИЧ

В настоящее время в диагностике ВИЧ используется двухуровневый подход – косвенные и прямые тесты. Косвенные тесты позволяют обнаружить в крови пациента специфические антитела к ВИЧ, а прямые тесты помогают выявить собственно сам ВИЧ и определить степень вирусной нагрузки на организм. В России стандартная диагностика ВИЧ включает следующие методы лабораторных исследований:

  • ИФА (иммуноферментный анализ).
  • Иммуноблот (иммунный блоттинг).

Также могут быть применены следующие методики:

  • Экспресс-тест ИХА (иммунохроматография).
  • ПЦР (полимеразная цепная реакция).

Диагностические принципы лабораторных исследований и степень их достоверности приведены в нижеследующей таблице.

Ссылка на основную публикацию
Снуп при беременности в третьем триместре применение
Снуп от насморка – можно ли беременным Когда происходит зачатие, материнский организм глобально перестраивается, а чтобы иммунная система не воспринимала...
Сливы польза и вред ГОРДОН
Чем полезны сливы Полезные свойства сливы проявляются при ревматизме и болезнях обмена веществ, а отвары и примочки из свежих и...
Слизистые выделения с прожилками крови (как сопли) перед, после месячных
Выделения в середине цикла с прожилками крови. Причины межменструальных выделений Как правило, продолжительность менструального цикла составляет двадцать восемь дней. Колебания...
Снятие на ЭКГ техника и алгоритм действия, как правильно снять электроды
Правильная техника снятия ЭКГ Метод электрокардиографии, предполагающий регистрацию электрических полей сердца и выведение графика на дисплее или бумаге, на протяжении...
Adblock detector