Цитогенетические исследования

Краситель используемый для определения полового хроматина

Х-хроматин (тельце Барра) представляет собой хромоцентр величиной около 1 мкм, красящийся всеми основными ядерными красителями более интенсивно, чем остальные хроматиновые структуры ядра. Фельген-положительная реакция свидетельствует о большой концентрации в нем ДНК.

Локализация Х-хроматина в ядре различна. В большинстве тканей он находится на внутренней поверхности ядерной оболочки и может иметь треугольную, плоско-выпуклую, трапециевидную, U-образную или гантелевидную форму. Иногда Х-хроматин имеет вид утолщения или зубца ядерной мембраны, соединенного с ядрышком тонкой хроматиновой нитью. В веретеновидных и палочковидных ядрах Х-хроматин располагается на одном из полюсов ядра.

Реже Х-хроматин располагается на ядрышке или в нуклеоплазме, при этой локализации он обладает сферической формой и трудно отличим от других хромоцентров, имеющих такой же размер, но неспецифических для пола. Поэтому в целях диагностики половой принадлежности клеток большинство исследователей учитывают хромоцентры, расположенные только у ядерной мембраны.
Положение Х-хроматина может меняться в одних и тех же клетках в зависимости от их функционального состояния, а также в процессе онтогенеза.

Х-хроматин обнаружен в клетках различных тканей у многих млекопитающих; у грызунов (хомяки, крысы, мыши, морские свинки) хроматиновые структуры ядер представлены большим количеством хромоцентров, затрудняющих выявление Х-хроматина. У человека половые различия в строении ядер установлены практически во всех тканях и органах.

Происхождение Х-хроматина. В процессе клеточного цикла хромосомы претерпевают закономерные преобразования, которые состоят в спирализации и деспирализации хромосом и их репродукции. В интерфазе максимально деспирализованные хромосомы образуют ядро с относительно гомогенным содержимым. Репродукция (синтез ДНК) хромосом происходит только в деспирализованном состоянии в период S-интерфазы.

Спирализуясь, хромосомы вступают в профазу митоза и достигают наибольшей спирализации в метафазе митоза и мейоза. При этом они обладают минимальной специфической активностью. Вместе с тем установлено, что хромосомы всегда неравномерно спирализованы по длине и разделяются на гетерохроматические и эухроматические районы. Морфологически эти районы различаются по интенсивности окраски и структурной организации.

Эухроматические районы в интерфазном ядре деспирализуются, в то время как гетерохроматические имеют тенденцию оставаться в спирализованном компактном состоянии в виде хромоцентров с высоким содержанием ДНК. Спирализованность гетерохроматических районов сопровождается неактивным состоянием генов, содержащихся в них. Эта особенность свойственна также некоторым эухроматнческим районам с высоко функционально дифференцированными генами. Будучи спирализованными в стадии интерфазного ядра, эухроматические районы становятся также генетически неактивными.

Читайте также:  Цефазолин инструкция по применению, аналоги, статьи » Справочник ЛС

Гетерохроматизация — универсальный механизм генетической инактивации хромосомных участков независимо от того, относятся ли они к гетерохроматическим или к эухроматнческим районам. Следовательно, хромоцентры, обнаруживаемые в интерфазном ядре, могут быть образованы как гетерохроматином, так и эухроматином. Одним из таких хромоцентров является Х-хроматин.

Еще Ваrr и Bertram высказали предположение о связи феномена Х-хроматина с Х-хромосомами. С тех пор Х-хромосомная природа Х-хроматина подтверждена и уточнена данными многочисленных исследователей.

Х-хроматин образован одной из Х-хромосом женской клетки, находящейся в гетерохроматизированном состоянии. Будучи спирализованной, эта хромосома генетически неактивна. В разных клетках сомы у женских особей, по принципу случайности, Х-хроматнн образует Х-хромосома, полученная либо от отца, либо от матери. Следовательно, клетки женского организма мозаичны по функции Х-хромосомы: в одних активна отцовская, в других материнская хромосома. Образование полового хроматина в женских клетках обусловлено генетически.

Это подтверждается тем, что в раннем периоде развития эмбриона человека, когда по виду гонад еще нельзя определить пол, яйцевые оболочки зародыша мужского пола не имеют Х-хроматина, несмотря на воздействие гормонов матери. У зародыша женского пола Х-хроматин появляется на 16-й день развития, когда в эмбрионе насчитывается 2500—5000 клеток.

Медицина мира

Цитогенетический анализ кариотипа (по микрофотографиям метафазных пластинок).

Проведение дактилоскопического анализа

Для изготовления собственных отпечатков пальцев необходимо следующее оборудование: фотографический каток, стекло площадью 20х20 см 2 , кусок поролона, типографская краска (или аналогичный материал), листы бумаги, ручная лупа (не менее 10 см в диаметре).

Метод приготовления отпечатков пальцев

На стекло наносят небольшое количество краски и тщательно раскатывают катком до тонкого равномерного слоя. Пальцы испытуемого поочередно прижимаются к стеклу, а затем прикладываются к бумаге, под которой лежит поролон. Палец ставится на ребро радиальной стороны и поворачивается так, чтобы отпечаталась вся поверхность пальцевой подушечки, вплоть до его ульнарной стороны. Поднимать палец надо осторожно, чтобы не сместить бумагу и не смазать рисунок. На листках подписывают фамилию, пол и возраст. Далее производится определение рисунка узора на каждом пальце левой и правой руки, записывается формула каждой из рук. Рассчитывается показатель TRGпо двум индексам из предложенных выше, и определяется дельтовый показатель.

Читайте также:  Волчаночный антикоагулянт при беременности что обозначает его присутствие в крови, чем опасно для пл

Таблица

Пальцы I II III IV V Всего
Правая рука
Левая рука

Аналогичную таблицу составить для определения дельтового показателя.

Пальцы I II III IV V Всего
Правая рука
Левая рука

Выводы: ___________________________________________________________

1. Зарисовать метафазную пластинку.

2. Подсчитать общее количество хромосом.

3. Идентифицировать хромосомы групп A (3 пары крупных метацентрических хромосом), В (две пары крупных субметацентрических хромосом), Д (3 пары средних акроцентрических хромосом), G (две пары мелких акроцентрических хромосом).

4. Определить половую принадлежность обследуемого индивида. При наличии 4-х мелких акроцентрических хромосом (2 пары G-хромосом) устанавливается женский кариотип. При наличии 5 мелких акроцентрических хромосом (2 пары G-хромосом и Y-хромосома) устанавливается мужской кариотип.

Перед взятием соскоба пациента просят обкусать зубами слизистую оболочку щеки и внутреннюю поверхность щеки протереть марлевой салфеткой. Эта процедура необходима для удаления разрушенных клеток, где половой хроматин не выявляется. При помощи щпателя или предметного стекла, предварительно обработанного спиртом, проводят легкий соскоб слизистой оболочки щеки. Беловатый налет наносят тонким слоем на обезжиренное предметное стекло. Препарат окрашивают краской ацет-орсеин (уксусная кислота фиксирует клетки, орсеин хорошо окрашивает ядерные структуры), покрывают покровным стеклом., представляя краске равномерно распределятся по мазку. Большим пальцем придавливают покровное стекло к предметному, предварительно положив на покровное стекло фильтровальную бумагу. Препарат рассматривают под микроскопом (90×). В поле зрения видны эпителиальные клетки слизистой оболочки полости рта с хорошо окрашенными ядрами. В ядрах половой хроматин располагается около внутренней ядерной оболочки в виде полулуния, зубчика, треугольника. Половой хроматин следует учитывать в клетках с неповрежденным ядром. Подсчет полового хроматина ведут на 100 клеток. В 100 соматических клетках здоровых женщин Х-половой хроматин выявляется в 40-60% ядер.

Определение полового хроматина

Цитогенетика: методы Дифференциальные окраски хромосом Изготовление ацетокарминовых препаратов Исследование хромосомных наборов млекопитающих Колхицинированные митозы у животных Давленные ацетокарминовые препараты Методы приготовления препаратов хромосом Микрометод для хромосомного анализа по Аракаки Определение полового хроматина Клетки костного мозга для хромосомного анализа Методика окрашивания корешков, бутонов. Клеточные культуры для изучения действия пестицидов
Читайте также:  Фуникулярный миелоз симптомы, диагностика, лечение

Определение полового хроматина в соскобах слизистых оболочек.

Ацеторсеиновый метод.

Клетки в процессе фиксации или окраски подвергаются воздействию кислоты (гидролизу). При этом хроматин ядра перестает резко окрашиваться и на его фоне четко выявляется темный комочек размером 1—1,5 мкм, представляющий собой так называемый гетеропикнотический участок спирализованной Х-хромосомы, в норме характерный для женского пола.

Посуда и оборудование.

1. Предметные стекла.

2. Покровные стекла.

4. Фильтровальная бумага.

1. К Фиксатор: 3 части метилового или этилового спирта, 1 часть ледяной уксусной кислоты.

2. Раствор красителя ацеторсеина: 1 г синтетического орсеина растворяют в 4 мл горячей 100% ледяной уксусной кислоты, сильно взбалтывая до растворения. После охлаждения до комнатной температуры добавляют 55 мл дистиллированной воды и еще несколько раз встряхивают. Охлаждают под струей водопроводной воды и фильтруют. Сохраняют в хорошо закупоренной склянке в холодильнике. Время от времени фильтрацию повторяют (срок годности не более 3 мес).

Взятие материала.

Перед взятием материала со слизистой оболочки полости рта нужно тщательно прополоскать рот теплой водой. Предметные стекла готовят так же, как для исследования лейкоцитарной формулы. Слегка обточенным металлическим или деревянным шпателем делают соскоб, нажимая достаточно энергично, чтобы добыть клетки среднего слоя слизистой оболочки (правой и левой половины полости рта раздельно).

Приготовление, фиксация и окраска препарата.

Из соскоба делают тонкие, ровные отпечатки, которые, не доводя до высыхания, помещают на 15—20 мин в метиловый или этиловый ацетат спирта. На фиксированный препарат наносят каплю красителя ацеторсеина и покрывают покровным стеклом. Излишки красителя отсасывают фильтровальной бумагой.

Возможные ошибки методики.

1. Длительная фиксация может привести к чрезмерному обезвоживанию и деформации (сморщиванию) ядер эпителия. Ядерная мембрана становится неровной, и анализ телец полового хроматина будет затруднен.

2. Свежеприготовленным ацеторсеином прокрашивают мазок в течение 20—60 мин в зависимости от «возраста» раствора. Незрелый краситель окрашивает лишь часть клеток с половым хроматином, поэтому следует контролировать под микроскопом степень окрашенности, чтобы не допустить ошибки при подсчете. Окрашивание мазка зрелым красителем в течение часа и более может привести к чрезмерному перекрашиванию хроматиновых скоплений в ядре, в результате чего трудно бывает на их фоне заметить половой хроматин. Перекрашенный мазок можно отмыть в крепкой уксусной кислоте.

Ссылка на основную публикацию
Цистит с кровью у женщин лечение, причины в конце мочеиспускания, кровь при цистите
Насколько опасно наличие крови при цистите у женщин? Цистит отличается рядом неприятных моментов, среди которых будет и кровь при цистите...
ЦЕФТРИАКСОН» инструкция по применению (уколы) как разводить, аналоги, цена в аптеках
Цефтриаксон : инструкция, применение, цена Цефтриаксон – антибиотик III поколения широкого спектра действия группы ценфалоспоринов, с эффектом продленного действия, который...
Цефтриаксон» инструкция, состав, лечение и цены в 2020 году
Как быстро действуют уколы цефтриаксона? Т.к. вы неавторизованы на сайте. Войти. Т.к. вы не трастовый пользователь. Как стать трастовым. Т.к....
Цистит симптомы и лечение в домашних условиях эффективными препаратами
Как бороться с циститом У некоторых рецидивы болезни случаются по три и больше раз в год! Речь о цистите –...
Adblock detector